Percorrer por autor "Saraiva, Nuno Ricardo de Almeida, orient."
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Item Avaliação da eficácia e segurança de formulações tópicas contendo ativos moduladores das enzimas LOX(2023) Santos, Mariana Borges de Araújo dos; Saraiva, Nuno Ricardo de Almeida, orient.A lysyl oxidase (LOX) e as lysyl oxidase like (LOXL), são enzimas participantes no processo de regeneração cutânea. A nanotecnologia permite formular sistemas de veiculação eficientes para aplicação tópica como os transportadores lipídicos nanoestruturados (NLCs). O presente estudo teve como objetivo explorar a aplicação de compostos moduladores das enzimas LOXL2 para o controlo da regeneração cutânea. Para tal, foi avaliado o impacto de compostos inibidores da LOXL2 identificados pelo grupo CBIOS (8?,9?-epoxycoleon-U-quinone - EPCU e Pimarane 7, 15-isopimaradien-19-ol - PN1) na viabilidade de queratinócitos humanos. Foi testado o impacto de PN1, EPCU e BAPN na viabilidade de queratinócitos humanos (células HaCaT), recorrendo ao método de Cristal Violeta. O IC50 de inibição da LOXL2 de EPCU é de 58,3 uM, e no presente estudo os queratinócitos submetidos a concentração de 50 nM sofreram uma redução significativa da sua viabilidade. Relativamente ao PN1, o seu IC50 de inibição da LOXL2 é de 104,4 uM, e a partir dos resultados obtidos neste estudo com a concentração máxima de 200 nM, o composto não impactua a viabilidade celular, sendo este promissor para estudos futuros. Adicionalmente, foi verificada a possibilidade de veiculação um composto inibidor das LOXL2 comercialmente disponível, o ?-aminopropionitrilo (BAPN) através de NLCs. Relativamente à caracterização das NLCs com e sem BAPN, o diâmetro hidrodinâmico (Dh) das NLCs sem BAPN foram menores do que das NLCs com ativo, o seu índice de polidispersão (PDI) não ultrapassou 0,3 em ambos os casos, e o potencial zeta situou-se entre -18 e -22 mV. As NLCs com BAPN apresentaram um valor de pH mais alto em relação às sem BAPN. Os testes de avaliação da estabilidade demonstraram que as formulações se mantiveram inalteradas. A segurança e eficácia das NLCs sem BAPN foi testada num grupo de voluntários humanos. No que diz respeito às medições de parâmetros cutâneos após aplicação tópica, os parâmetros perda transépidermica de água (PTEA), eritema e hidratação revelaram que as NLCs têm boa compatibilidade, mas o aumento da hidratação foi pequeno. O trabalho permitiu concluir que as concentrações máximas dos inibidores testados que não induzem alterações na viabilidade das células são respetivamente: 500 nM para BAPN, 20 nM para EPCU e 200 nM para PN1. O BAPN foi incorporado em NLC, mas por ser ionizado reduziu o seu potencial zeta que poderá condicionar a estabilidade ao longo do tempo. As NLCs podem ser consideradas compatíveis com a pele. Estes dados evidenciam o potencial destes compostos como possíveis moduladores do processo de cicatrização, que poderão ser veiculados por NLCs. Palavras-chave: células HaCat, BAPN, viabilidade celular, NLC, regeneração cutâneaItem Desenvolvimento de novas vacinas anti-virais : da bancada até aos planos de vacinação(2020) Nunes, Patrícia Vanessa da Silva; Saraiva, Nuno Ricardo de Almeida, orient.Os vírus são agentes infecciosos e parasitas obrigatórios. Na china, foi desenvolvida a prática da variolação como forma preventiva da varíola, prática que foi levada para a Europa e que mostrou ser eficaz, reduzindo a taxa de mortalidade por varíola. Esta técnica foi importante para o desenvolvimento de outras vacinas. Em Portugal, o Plano Nacional de Vacinação fez recentemente 54 anos de existência e tem tido excelentes resultados, com uma doença erradicada, cinco doenças eliminadas e sete doenças controladas. Existe atualmente a necessidade de criar novas vacinas que induzam uma resposta imunitária adequada. O objetivo principal é sempre criar novas vacinas mais eficazes e seguras. Para isso várias estratégias de vacinação têm vindo a ser continuamente desenvolvidas. Através do estudo feito foi possível verificar que ainda existem muitos países sem algumas vacinas anti-virais no seu Plano de Vacinação. Por outro lado, há ainda alguns países a introduzirem a vacina contra a Hepatite B. Entre o ano 2000 e 2009 foi introduzida em 93 países, mas ainda se verifica a introdução da mesma no ano 2019 em três países. A nível global a adesão à vacinação tem vindo a aumentar. É exemplo disso o a vacina do HPV, estima-se que 47 milhões de mulheres de todo o mundo foram vacinadas. Existem vacinas que não têm tanta adesão, como a vacina do Rotavírus, em que as taxas de imunização são muito baixas. Nos últimos 5 anos têm-se desenvolvido novas vacinas anti-virais, muitas delas contra o vírus do Ébola, pois há um número acrescido de mortes por essa doença nos últimos anos. O candidato mais próximo é o rVSV-ZEBOV, mas estão em ensaios clínicos outras vacinas promissoras. Em ensaios clínicos de fase I a fase III temos também vacinas para o vírus do Dengue, HBV e Poliovírus. A ambição é chegar a 2030 evitando 167 milhões de novos casos de doenças, salvar 1,9 milhões de vidas e economizar 58 mil milhões de USD, mas para isso temos que definir novos desafios e objetivos.Item Papel do ca2+ nos mecanismos celulares envolvidos na metastização(2020) Laborinho, Maria Inês Azevedo Ribeiro; Saraiva, Nuno Ricardo de Almeida, orient.O processo de metastização compreende várias etapas sequenciais tais como alterações da migração e adesão célula-célula, degradação e invasão da membrana basal, intravasamento, sobrevivência na corrente sanguínea, extravasamento, formação de micrometástases, angiogénese e crescimento secundário de tumores. O Ca2+ é um regulador fundamental da migração celular. Em determinados tipos de cancro, há desregulação dos canais e proteínas que regulam os fluxos intracelulares deste ião. Estas alterações têm sido implicadas na motilidade, metabolismo celular e proliferação celular, bem como na produção de espécies reativas de oxigénio. Uma parte importante da investigação que avalia as vias de sinalização de Ca2+ e a sua relevância no cancro, concentra-se em determinar mudanças aos níveis da expressão de proteínas responsáveis pela regulação das concentrações intracelulares de Ca2+, como é exemplo a proteína antiapoptótica do Golgi (GAAP). Este canal de iões inibe a apoptose e promove a adesão e migração de células. O trabalho realizado teve como principal objetivo o estudo do impacto da expressão da GAAP no processo de sobrevivência celular a diferentes pHs. Para tal foi testada a viabilidade celular (através do ensaio de Cristal Violeta) de linhas celulares de osteossarcoma e cancro de mama com níveis basais ou com sobrexpressão de GAAP quando mantidas em cultura em meios com vários pHs. As linhas celulares foram mantidas por um curto período (4 dias) ou por um longo período (2 ou 3 semanas) a pHs com valores entre os 6.6 e os 7.8. Foi possível verificar que com pH do meio mais elevados, as células controlo têm tendência a morrer ao fim de períodos longos em cultura sem troca de meio, no entanto as linhas celulares que sobrexpressam a hGAAP apresentam uma maior capacidade de sobrevivência. Estas quando em comparação com as outras demonstram uma maior sobrevivência quando submetidas a um ambiente desfavorável, o que permite concluir que a sua sobrexpressão confere proteção às células a pHs mais altos.