Percorrer por autor "Fonseca, Joana Margarida do Couto"

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    Dupla marcação imunocitoquímica em lâminas previamente coradas : imunofenotipagem de linfoma canino usando apenas uma lâmina citológica
    (2024) Matias, Martim Moreira da Cunha e Cabrita; Faculdade de Medicina Veterinária; Cunha, Maria Nazaré Pinto da; Fonseca, Joana Margarida do Couto
    A imunocitoquímica (ICC) é uma técnica que pode ser usada para imunofenotipagem de linfoma canino. Contudo, a utilidade da ICC é limitada pela quantidade e qualidade do material citológico disponível para a mesma. Os métodos automatizados são mais precisos e tempo eficientes, mas os protocolos tradicionais usam apenas um marcador por lâmina, obrigando ao uso de pelo menos duas lâminas citológicas por caso. A marcação multiplex imunoenzimática permite a localização de dois ou mais antigénios diferentes na mesma amostra com recurso ao uso de diferentes enzimas e cromogéneos para cada marcador. O presente trabalho foi conduzido com o objetivo de avaliar o uso de uma técnica de ICC de dupla marcação sequencial numa lâmina citológica previamente corada com May - Grunwald - Giemsa (MGG) para imunofenotipagem de linfoma canino. Para tal, foram retrospetivamente selecionados 31 casos de linfoma canino com diagnóstico de imunofenótipo previamente estabelecido por ICC simples nos seis meses antecedentes, para os quais lâminas de sobra coradas com MGG estavam ainda disponíveis. Para cada caso, foi realizada ICC dupla para Pax5 e CD3 numa plataforma Leica Bond III e as reações desenvolvidas com os cromogéneos Fast Red e DAB para visualização de cada marcador, respetivamente, e as lâminas digitalizadas com um sistema Leica Aperio GT 450. O diagnóstico, percentagem de células positivas e intensidade da coloração foram comparados entre a marcação dupla e a marcação simples. A funcionalidade de "desconvolução de cor" do software QuPath foi usada para facilitar interpretação da coloração. Em 87% dos casos (27/31) foi possível atribuir um imunofenótipo, aumentando para 93% (27/29) se as lâminas de fraca qualidade forem excluídas. Os restantes casos (2/29) foram definitivamente considerados inconclusivos devido a ausência de coloração do marcador Pax5. A percentagem de células positivas foi idêntica entre as duas técnicas para todos os casos, mas a intensidade da coloração ligeiramente menor para o marcador Pax5, sobretudo em casos de linfoma de células T. Os autores concluem que a dupla marcação ICC pode ser realizada em apenas uma lâmina citológica, providenciando excelente concordância com ICC simples em lâminas de boa qualidade. A avaliação simultânea de marcadores de células B e T é um procedimento simples,rápido e fiável que evita a necessidade de recolheita de amostras nos casos em que apenas uma lâmina citológica está disponível. Palavras - Chave: marcação multiplex imunoenzimática, DAB, Fast Red, QuPath, desconvolução de cor