Mestrado em Engenharia Biotecnológica
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Percorrer Mestrado em Engenharia Biotecnológica por autor "Charmier, Maria Adília Januário, orient."
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Item Aspectos da patogenia da piómetra na cadela : fímbrias tipo 1 de escherichia coli e mecanismos de defesa no endométrio(2017) Diniz, Patrícia Ribeiro Leal da Silva; Charmier, Maria Adília Januário, orient.Piómetra é uma doença do foro reprodutivo comum em cadelas sendo Escherichia coli a bactéria mais frequentemente isolada. Neste estudo estabelecemos dois objectivos distintos: a) avaliar a capacidade de E. coli associada a piómetra para transcrever os genes fim e expressar fímbrias tipo 1; b) estudar a resposta imune inata do endométrio, sob a forma de explantes, após estimulação com E. coli. De modo a determinar se os genes fim são transcritos, a orientação (On/Off) do elemento de ADN que contém o promotor e conduz à transcrição dos genes fim, foi determinada por amplificação da região do promotor por PCR, seguida da digestão com a enzima HinfI. Para tal, foram efectuados ensaios em três condições de cultura; agar, arejada, estática. Os resultados mostraram que a maioria dos isolados tem a capacidade de mudar da posição Off para a posição On. Em agar, a posição Off foi predominante (60% dos isolados) e 40% dos isolados apresentaram uma mistura de células na posição On e Off. Na cultura arejada, 80% dos isolados tinham células em posições On e Off e 20% estavam na posição Off. Na cultura estática, a maioria dos isolados (67%) tinha células nas posições On e Off e 7% mudaram completamente para a posição On. Neste estudo demonstrámos ainda que os isolados de E. coli associados a piómetra têm a capacidade de expressar fimbrias tipo 1, uma vez que aglutinam células de levedura. No que se refere ao primeiro objectivo, concluímos que os isolados de E. coli de piómetra têm a capacidade de transcrever genes fim e expressar fimbrias tipo 1. No entanto, a transcrição e expressão estão dependentes de estímulo ambiental. Quanto ao segundo objectivo, mostrámos que os explantes endometriais estimulados com E. coli transcrevem genes que codificam para mediadores de inflamação. Os níveis de transcrição dos genes que codificam para o TNFα, IL-6 e CXCL10 foram significativamente mais elevados em explantes estimulados com E. coli., comparativamente a explantes não estimulados. Por outro lado, a transcrição do gene IL-1β foi menor nos explantes estimulados. Estes resultados demonstram que os explantes de endométrio foram capazes de montar uma resposta imunitária.Item Estudo microbiológico de óleos essenciais e extratos de orégãos e as suas aplicações na saúde(2016) Morgado, Susana Raquel Alves; Charmier, Maria Adília Januário, orient.A Organização Mundial da Saúde encontra-se preocupada com o número de pessoas que são infetadas e que morrem anualmente por contraírem infeções causadas por bactérias multirresistentes. Estima-se que morram mais pessoas infetadas com bactérias resistentes do que em acidentes de viação. Esta situação agrava-se também pela falta de resposta na criação de novos antibióticos. Cada vez mais as bactérias adaptam-se aos antibióticos, por isso a descoberta de novos princípios ativos torna-se lenta dada a rápida adaptabilidade das bactérias. Este trabalho prático foca-se no estudo de atividade antimicrobiana de novos compostos naturais que possam ser alternativas ou em combinação com antibióticos nos tratamentos de infeções causadas por bactérias resistentes. Para este trabalho efetuaram-se os seguintes testes microbiológicos: estudos de suscetibilidade antibacteriana; Kirby – Bauer; suscetibilidade em meio sólido, determinação da concentração mínima inibitória e concentração mínima bactericida, reversões de resistência a determinados antibióticos e determinação de sinergismos pela técnica de checkerboard. Estes testes realizaram-se com dois tipos de bactérias resistentes a antibióticos frequentes em unidades hospitalares, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA). Para se determinar a atividade antimicrobiana de compostos naturais, utilizam-se 7 tipos de óleos essenciais, nomeadamente, Carvacrol, Cinamaldeído, Tomilho, Óleo do Chá (tea tree oil), óleo de Cravo, óleo de Casca de Canela e Geraniol e também extrato natural de orégão, extraído por duas técnicas diferentes (soxhlet e micro-ondas). Verificou-se que dos 7 óleos testados, o carvacrol apresentou uma grande atividade antimicrobiana. Os mesmos resultados foram obtidos com o extrato natural de orégão. No entanto, observou-se que pela técnica de soxhlet que o extrato do orégão inibe mais o crescimento bacteriano do que pela técnica do micro-ondas. Com este trabalho pode-se concluir que a utilização de compostos naturais poderá ajudar no futuro na inibição do crescimento bacteriano ou mesmo na eliminação de bactérias resistentes a antibióticos.