Percorrer por autor "Fernandes, Ana Sofia Gregório"

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    Ativadores de superfície únicos versus mistos em transferossomas para veicular cafeína : avaliação físico-química e de citotoxicidade
    (Edições Universitárias Lusófonas, 2021) Guerreiro, Íris; Rodrigues, Marta; Fernandes, Ana Sofia Gregório; Rosado, Catarina; Leite, Catarina Pereira; Escola de Ciências e Tecnologias Saúde
    O desempenho dos transferossomas como sistemas nanovesiculares para melhorar a permeação cutânea de compostos bioativos pode ser modulado de acordo com a sua composição em ativadores de superfície (EAs). Segundo a literatura, o tamanho, a deformabilidade e a eficiência de encapsulação destas vesículas dependem do equilíbrio hidrofílicolipofílico (HLB) dos tensioativos não-iónicos usados como EAs. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o impacto nas propriedades físico-químicas e no perfil de citotoxicidade in vitro de formulações transferossomais constituídas por EAs únicos ou mistos, com valores de HLB opostos. Os transferossomas obtidos com tensioativos não-iónicos únicos ou mistos (Tween® 80 e/ou Span® 80) foram preparados na presença e ausência de cafeína, utilizada como composto modelo hidrofílico. Os transferossomas preparados, independentemente da sua composição em EAs, apresentaram propriedades físico-químicas promissoras para aplicações cutâneas, sendo estáveis durante 1 mês sob armazenamento refrigerado. Além disso, todas as formulações transferossomais foram compatíveis com uma linha celular de queratinócitos após tratamento por 24 h. No conjunto, estes dados preliminares sugerem que a utilização de tensioativos não-iónicos mistos como EAs poderá ser mais explorada para modular o desempenho dos transferossomas como promotores da permeação cutânea. Palavras-chave: Sistemas vesiculares; nanotecnologia; tensioativos não-iónicos; cafeína
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    Expression profile of cellular redox and calcium signalling-related genes : role in breast cancer progression
    (2024) Ramos, Sofia; ECTS - School of Health Sciences and Technologies; Saraiva, Nuno; Fernandes, Ana Sofia Gregório; de la Villa Polo, Pedro
    Breast cancer (BC) remains the most prevalent cancer among women. The identification of new biological pathways, biomarkers, and therapeutic targets is essential for improving patient survival rates. The levels of reactive oxygen species (ROS) and Calcium ion (Ca2+) fluxes play a crucial role in BC progression. Leveraging gene expression data from The Cancer Genome Atlas (TCGA) Breast Invasive Carcinoma (BRCA) dataset and bioinformatics tools, this study aimed to identify novel druggable targets or prognostic biomarkers based on individual or combined expression profiles of redox and Ca2+ signalling-related genes with impact in BC progression. The first step was to identify and evaluate the online platforms that allow the analysis of BRCA gene expression and patient survival. The selection criteria defined were: user-friendliness, presenting global gene expression and between stages and patient survival, and providing straightforward methods for data extraction. Among the platforms assessed, GEPIA and UALCAN were deemed the most suitable for our analysis due to their robust features and ease of use. Recognizing the critical interplay between Ca2+ and ROS in BC progression, we aimed to evaluate how the co-dysregulation of Ca2+ and ROS-associated genes influences BC prognosis. This study utilized a bioinformatics approach, using data from the TCGA BRCA, to explore the association between the expression of specific genes involved in redox (LOXL2, LOXL3, PRDX4, TXN, TXNRD1, GLRX2, GLRX3, SOD2, NOX4) and Ca2+ homeostasis (TRPM8, CALM2, CAMK2G, ATP2C2, PLCD1, ORAI1, STIM1) on BC patient survival. Genes were selected based on significant expression differences between normal and tumour tissues and their association with survival, measured by hazard ratios. The cumulative proportion of survival at 5 years post-diagnosis was calculated for each quartile of expression of one gene within the population expressing high (Q4) or low levels (Q1) of a second gene. Gene pairs that consistently impacted cumulative survival were further analysed through enrichment analysis, focusing on biological processes from the Gene Ontology. This analysis revealed significant correlations between the simultaneous dysregulation of specific gene pairs and BC patient survival, such as GLRX3/LOXL3, PRDX4/LOXL2, NOX4/PRDX4, TRPM8/CAM2G, ATP2C2/TRPM8, CAMK2G/STIM1, ATP2C2/GLRX2, and PLCD1/TXNRD1. These gene pairs were consistently co-dysregulated with genes associated with critical processes in BC, such as cell cycle regulation, adhesion, and cellular projection. These findings highlight the potential of these gene pairs as biomarkers or therapeutic targets in BC. An example of redox-active proteins dysregulated in BC is the family of Lysyl oxidases. Lysyl oxidase (LOX) and LOX-like1-4 (LOXL1-4) enzymes impact cell migration and can contribute to iii the metastasis of BC. In this context, understanding the differential impact of each enzyme on BC progression is essential for directing drug development. Utilizing the TCGA-BRCA database and tools like GEPIA 2.0 and TIMER2.0, the study revealed that LOXL1, LOXL2, and LOXL3 are significantly overexpressed in BC tissues. This overexpression is linked to poorer disease-free survival (DFS) and overall survival (OS), particularly in specific BC subtypes. In contrast, LOXL4 expression is notably reduced, especially in advanced stages of BC, and its downregulation is associated with worse DFS and OS in HER2+ patients. The analysis also indicated that high levels of LOXL1, LOXL2, and LOXL3 are correlated with an increase in cancer-associated fibroblasts (CAFs) and a reduction in the infiltration of immune cells, such as B cells and T cells. Additionally, there is a strong correlation between the expression of LOX, LOXL1, and LOXL2 and other extracellular matrix (ECM)-related genes, including TIMP2, PDGFR-β, MMP-2, MMP-14, FN1, ITGA5, and ZEB1. These findings suggest that while inhibiting LOXL3 may have varying effects depending on the BC subtype, targeting LOXL1 and LOXL2 could be a more effective therapeutic strategy. Conversely, inhibiting LOXL4 might not be as beneficial. This study highlights the importance of considering the specific roles of LOX family members and expression patterns in developing targeted therapies for BC. The identification of redox-related genes differentially expressed in HER2+ BC compared to normal tissues, their association with patient survival, and with tumour cell infiltrate can potentially lead to the identification of new prognosis biomarkers. Using Gene Ontology and keywords related to oxidative processes, the study filtered data from the TCGA-BRCA-HER2+ database. GEPIA2 and UALCAN were employed to assess the association between the expression of redox homeostasis-related genes on patient survival and to examine differences in expression between HER2+ BC patients and normal tissues (p <0.05). This approach led to the identification of 55 potentially relevant redox-related genes. To explore the relationship between gene expression and cell infiltration levels in HER2+ BC patients, the TIMER2.0 tool was utilized. Out of the 55 genes identified, only six—EZH2, MAPK13, NFE2L2, HDAC2, MACROH2A1, and TSC2— have been experimentally validated in the context of HER2+ BC. However, several redox-related genes were significantly dysregulated, although their specific roles in this subtype are not fully explored. Among these, 17 genes, including TXNRD1 and EZH2, were overexpressed in HER2+ tumours, while 26 genes, such as NFE2L2 and TSC1, were downregulated and correlated with increased infiltration of macrophages and neutrophils. Additionally, ten redox-related genes demonstrated correlations with either high or low HR, suggesting an influence on tumour infiltrates. These findings underscore the potential of redox-related genes as therapeutic targets iv or biomarkers in HER2+ BC, emphasizing the importance of further research to clarify their roles in cancer progression and therapy resistance. Although experimental validation is needed, all the studies presented in this thesis identified novel potential BC biomarkers and therapeutic targets; and deepened our understanding of the interactions between redox and Ca2+-related genes and other genes, and their association with tumour infiltrates and BC patient outcomes. Thus, contributing to the identification of novel potential prognosis biomarkers or druggable targets.
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    Papel do Farmacêutico Comunitário no acompanhamento da pessoa com doença oncológica : perceção do doente/sobrevivente
    (2024) Bragança, Cristiana Raquel Marques; Escola de Ciências e Tecnologias Saúde; Costa, João Guilherme Feliciano da; Fernandes, Ana Sofia Gregório
    A doença oncológica atualmente afeta globalmente milhões de pessoas, posicionando-se numa das principais causas de morte a nível mundial, impondo tratamentos complexos e com elevado impacto no doente. Na abordagem a esta doença, o envolvimento e colaboração das equipas multidisciplinares, incluindo os farmacêuticos é crucial em todas as etapas, desde o diagnóstico, aos tratamentos e à gestão dos efeitos secundários inerentes a estes. Deste modo, com este trabalho, pretendeu-se estudar e avaliar a perceção sobre o papel do farmacêutico comunitário no acompanhamento da pessoa com doença oncológica na perspetiva do doente/sobrevivente. Para tal, realizou-se um estudo observacional, transversal a 105 indivíduos doentes ou sobreviventes de doença oncológica, residentes em Portugal, através de um questionário online auto-reportado. Os resultados revelaram que a maioria dos inquiridos sente confiança no farmacêutico comunitário. Globalmente, 43,8% e 53,3% dos inquiridos, consideram o conhecimento destes profissionais de saúde suficiente nas medidas de prevenção e diagnóstico, respetivamente. Por sua vez, na gestão dos efeitos secundários do tratamento oncológico, a maioria dos inquiridos (61%), considerou que o conhecimento do farmacêutico comunitário era "Bom ou Elevado". A larga maioria dos investigados considerou que é importante a existência de uma comunicação entre as equipas hospitalares e o farmacêutico comunitários (~80%) e seria relevante a implementação de um serviço personalizado nas farmácias para o seu acompanhamento (~70%). Conclui-se com este estudo que, apesar da maioria dos inquiridos sentir confiança no farmacêutico comunitário, existe ainda uma elevada margem para tornar o seu papel mais ativo no acompanhamento da doença oncológica. Adicionalmente, na perspetiva do doente oncológico é essencial a existência de uma comunicação entre o hospital e a farmácia comunitária, bem como a criação de um serviço que permita um melhor acompanhamento no decurso da sua doença. Palavras-chave: cancro; farmacêutico comunitário; doente oncológico; tratamento; intervenção farmacêutica
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    Papel do farmacêutico comunitário no acompanhamento da pessoa com doença oncológica : perceção do farmacêutico
    (2024) Saragoça, Joana dos Santos; Escola de Ciências e Tecnologias Saúde; Fernandes, Ana Sofia Gregório; Costa, João Guilherme Feliciano da
    O cancro tem elevado impacto na qualidade de vida dos doentes, devido aos seus sintomas e efeitos adversos dos tratamentos. Nas farmácias comunitárias são desempenhados serviços que podem apoiar o doente oncológico. Os objetivos deste trabalho foram realizar uma revisão da literatura sobre a doença oncológica e o papel do farmacêutico comunitário no acompanhamento do doente oncológico, bem como investigar a perceção dos farmacêuticos comunitários relativamente a este assunto, através de um questionário construído para este efeito. Dos farmacêuticos inquiridos, apenas 1,9% fazia acompanhamento estruturado destes doentes. O acompanhamento e principalmente motivado pela gestão de reações adversas e interações medicamentosas. As intervenções identificadas como mais frequentes foram a vacinação, proteção da radiação solar e gestão de efeitos secundários do tratamento. 66,1% dos farmacêuticos consideraram ter um papel relevante na melhoria da qualidade de vida destes doentes; 77,2% acharam relevante a existência de uma consulta de cuidados farmacêuticos na doença oncológica e identificaram como barreiras a sua implementação a falta de articulação com os serviços hospitalares e baixo conhecimento técnico. A formação especializada em oncologia foi o fator que mais impactou as respostas. Conclui-se assim que e necessário aumentar a formação do farmacêutico em oncologia e criar sistemas de informação adequados. Palavras chave: Oncologia, Farmacêutico Comunitário, Acompanhamento, Prevenção, Rastreio, Serviços
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    Pharmacological targeting of LOXL2 in breast cancer
    (2025) Ferreira, Sandra Lourenço; ECTS - School of Health Sciences and Technologies; Fernandes, Ana Sofia Gregório; Díaz-Lanza, Ana María
    O cancro da mama é uma das principais causas de doença e morte entre as mulheres em todo o mundo, sendo também uma patologia altamente heterogénea e complexa, com uma interação multifacetada entre fatores genéticos e ambientais. Características específicas do cancro da mama, como a angiogénese, invasão e metastização, podem ser facilitadas pela degradação da matriz extracelular (MEC). No cancro da mama, esta degradação é influenciada pela desregulação das metaloproteinases e pelo aumento da síntese de colagénio, particularmente através da atividade das enzimas da família das lisil oxidase (LOXs). As enzimas LOXs promovem as ligações cruzadas do colagénio e da elastina, aumentando a rigidez da MEC. É demonstrado que, especificamente a LOXL2, promove a progressão do cancro da mama de várias formas, pelo efeito na rigidez da MEC e na modulação de fatores que regulam a transição epitélial mesenquimal. A inibição das LOXs e da LOXL2 tem sido sugerida como uma estratégia promissora para prevenir a metastização e invasão do cancro da mama. O BAPN (β-aminopropionitrilo) foi o primeiro inibidor identificado, e é derivado de uma fonte natural. Mais recentemente, foram desenvolvidos novos compostos sintéticos que atuam como inibidores das enzimas LOXs. No entanto, ainda não está definido qual o perfil de seletividade ideal destes inibidores relativamente às várias enzimas LOXs para um tratamento eficaz do cancro da mama. Este trabalho começou com o desenvolvimento de uma abordagem bioinformática para analisar os perfis de expressão das enzimas LOXs e potenciais correlações com os resultados clínicos no cancro da mama. Ao analisar os dados de expressão de mRNA da base de dados TCGA, foi demonstrado que a sobrexpressão da LOX, LOXL1 e LOXL2 estava associada a resultados distintos quando comparada com LOXL3 e LOXL4, em termos de sobrevivência dos doentes, composição dos infiltrados tumorais e padrão de genes co-desregulados. Isto sublinha a importância de compreender os diferentes papéis das LOXs no cancro da mama, de modo a perceber como a inibição de enzimas específicas poderá trazer benefícios terapêuticos. Nesta investigação, a LOXL2 destacou-se por estar associada a um pior prognóstico, particularmente no cancro da mama triplo-negativo (TNBC). Na procura de novos inibidores da LOXL2, foi feito um estudo de docking com uma biblioteca de compostos derivados da 4-tiazolidinona, tendo sido identificados cinco potenciais inibidores. Entre estes, o Les5740 demonstrou atividade inibitória da LOXL2 (valor de IC50 de 27 µM) e apresentou um perfil de baixa citotoxicidade em várias linhas celulares tumorais e normais, demonstrando maior citotoxicidade para a linha celular TNBC MDA-MB-231. Foram realizados diversos ensaios para caracterizar o impacto do Les5740 em células TNBC, sendo que os efeitos mais pronunciados foram na quimioinvasão e na morfologia celular. Estes resultados são consistentes com a potencial redução da rigidez da MEC esperada com a inibição da LOXL2. Os ix resultados demonstram o potencial do Les5740 como estrutura-base para o desenvolvimento de inibidores mais potentes e seletivos da LOXL2 para o tratamento do cancro da mama. Estudos de docking computacional foram realizados com inibidores da LOXL2 previamente reportados na literatura, para explorar os seus potenciais modos de ligação a esta enzima. Foram também realizados estudos de docking com a biblioteca de compostos disponível internamente no CBIOS. Compostos cujas estruturas estão em linha com as informações obtidas através dos estudos de química computacional foram testados quanto à sua atividade anti-LOXL2, utilizando o ensaio Amplex Ultra Red. Dois compostos, AK81 e AK75, foram identificados como capazes de inibir a LOXL2 com valores de IC50 na ordem do micromolar. Os seus efeitos na viabilidade celular, migração, invasão 2D e 3D, morfologia, danos no ADN e na atividade das metaloproteinases da matriz foi avaliada em células MDA-MB-231 (TNBC) e/ou MCF10A (mama normal). O AK81 demonstrou inibição da quimiotaxia e quimioinvasão com citotoxicidade mínima para as células não tumorais, enquanto o AK75 demonstrou efeitos citotóxicos em ambas as linhas celulares e uma marcada inibição da invasão 3D. Ambos os compostos reduziram a atividade da MMP2 e alteraram a morfologia celular, contribuindo potencialmente para os seus efeitos anti-invasivos. Os compostos naturais também podem representar uma fonte valiosa para a descoberta de novos inibidores de LOXs. Neste contexto, diterpenóides do tipo pimaranos e os seus derivados glicosilados foram investigados quanto ao seu potencial inibitório da LOXL2. Foram identificados dois compostos com atividade inibitória ligeira da LOXL2. Embora a sua eficácia moderada limite o seu potencial imediato como agentes terapêuticos, estas estruturas podem servir como ponto de partida para o desenho racional e otimização estrutural com vista ao desenvolvimento de inibidores da LOXL2 mais potentes. Além disso, este estudo reforça o conceito de que a conjugação de um grupo açúcar a agentes antitumorais pode melhorar a sua captação pelas células tumorais, potencialmente aumentando a eficácia terapêutica. Outros compostos naturais, isolados de plantas do género Plectranthus da família Lamiaceae, também foram explorados. A coleona EPCU destacou-se como um inibidor moderado da LOXL2. Em resumo, esta tese explorou de forma abrangente a LOXL2 como um elemento-chave na progressão do cancro da mama e um alvo promissor para a intervenção terapêutica, particularmente no contexto desafiante do cancro da mama triplo-negativo. Através da combinação de bioinformática, química computacional, avaliação de compostos sintéticos e naturais e avaliação in vitro do fenótipo celular, foram identificados e caracterizados vários potenciais novos inibidores da LOXL2. Os resultados desta tese oferecem uma base sólida para o desenvolvimento contínuo de terapias direcionadas à LOXL2 na luta contra o cancro da mama.