Mestrado em Engenharia Biotecnológica

URI permanente para esta coleção:

http://hdl.handle.net/10437/10758

Navegar

Percorrer Mestrado em Engenharia Biotecnológica por assunto "BIOTECNOLOGIA"

A mostrar 1 - 2 de 2
  • Item
    Breaking the wall! Deconstruction of the celullosome - a journey from cohesin-dockerinexpression to novel carbohydrate binding module structures
    (2016) Pires, Ana José de Oliveira Nunes; Sampaio, Pedro, orient.
    Os Ruminantes estabelecem relações simbióticas, altamente complexas, com bactérias anaeróbias produtoras de celulossomas de forma a degradarem eficientemente os polissacarídeos da parede celular de vegetal. Os celulossomas são compostos por enzimas modulares constituídas por módulos catalíticos ligados a módulos não-catalíticos, envolvidos em ligações proteína:carbohidratos (Carbohydrate-Binding Modules ou CBMs) e interações proteína:proteína (Coesinas:Doquerinas ou Coh-Doc). Este projeto visa ampliar o conhecimento dos celulosomas e dos seus componentes, explorando tanto o complexo Coesina-Doquerina como os CBMs. Apesar de já se encontrar bem caracterizado, o processo de produção e cristalização do complexo Coesina-Doquerina de Bacteroides cellulosolvens, ainda necessita de alguma otimização. Forçando o complexo a adotar apenas uma das suas duas conformações possíveis, através de mutagénese direta, pretende-se testar e otimizar a sua purificação. Os mutantes positivos foram testados em diferentes condições de crescimento, sendo a melhor expressão obtida em células BL21 induzidas a 25ºC em meio LB. Dos vários CBMs ainda por caraterizar de Ruminococcus flavefaciens estirpe FD-1 selecionámos o Rf2 e o Rf4 para, através de géis de afinidade, determinar a sua afinidade a diversos substratos: HEC, β-Glucano, Galactomanano e xiloglucano. Concluímos que a RF2 apresenta maior afinidade para Galactomanano e xiloglucano variando entre 56 e 49 (w/v)-1, respetivamente. A Rf4 apresenta apenas afinidade para o xiloglucano com um Ka significativo de 296 (w/v)-1. Por último, a estrutura deste novo CBM-Rf2 foi resolvida por difração de raios-X por dispersão anómala de comprimento de onda único.
  • Item
    Estudo microbiológico de óleos essenciais e extratos de orégãos e as suas aplicações na saúde
    (2016) Morgado, Susana Raquel Alves; Charmier, Maria Adília Januário, orient.
    A Organização Mundial da Saúde encontra-se preocupada com o número de pessoas que são infetadas e que morrem anualmente por contraírem infeções causadas por bactérias multirresistentes. Estima-se que morram mais pessoas infetadas com bactérias resistentes do que em acidentes de viação. Esta situação agrava-se também pela falta de resposta na criação de novos antibióticos. Cada vez mais as bactérias adaptam-se aos antibióticos, por isso a descoberta de novos princípios ativos torna-se lenta dada a rápida adaptabilidade das bactérias. Este trabalho prático foca-se no estudo de atividade antimicrobiana de novos compostos naturais que possam ser alternativas ou em combinação com antibióticos nos tratamentos de infeções causadas por bactérias resistentes. Para este trabalho efetuaram-se os seguintes testes microbiológicos: estudos de suscetibilidade antibacteriana; Kirby – Bauer; suscetibilidade em meio sólido, determinação da concentração mínima inibitória e concentração mínima bactericida, reversões de resistência a determinados antibióticos e determinação de sinergismos pela técnica de checkerboard. Estes testes realizaram-se com dois tipos de bactérias resistentes a antibióticos frequentes em unidades hospitalares, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA). Para se determinar a atividade antimicrobiana de compostos naturais, utilizam-se 7 tipos de óleos essenciais, nomeadamente, Carvacrol, Cinamaldeído, Tomilho, Óleo do Chá (tea tree oil), óleo de Cravo, óleo de Casca de Canela e Geraniol e também extrato natural de orégão, extraído por duas técnicas diferentes (soxhlet e micro-ondas). Verificou-se que dos 7 óleos testados, o carvacrol apresentou uma grande atividade antimicrobiana. Os mesmos resultados foram obtidos com o extrato natural de orégão. No entanto, observou-se que pela técnica de soxhlet que o extrato do orégão inibe mais o crescimento bacteriano do que pela técnica do micro-ondas. Com este trabalho pode-se concluir que a utilização de compostos naturais poderá ajudar no futuro na inibição do crescimento bacteriano ou mesmo na eliminação de bactérias resistentes a antibióticos.